京胡的定弦是按照五度相生律來確定的，即相鄰兩弦的音高關係為純五度。在京胡中，內弦與外弦的音高關係為純五度，這意味著內弦的音高相當於外弦的下方純五度。定弦時，需要考慮到演員的嗓音特點、樂曲的風格和情感表達、與其他樂器的配合以及琴弓的鬆緊程度。
演員的嗓音特點：不同演員的嗓音特點不同，因此京胡的定弦也要根據演員的特點進行調整，以確保音準和音色的協調。
樂曲的風格和情感表達：京劇中有許多不同的流派和風格，如老生、小生、花旦等，每種流派和風格的定弦都有所不同。因此，演奏者需要根據樂曲的具體情況來調整定弦。
與其他樂器的配合：京胡是一種綜合性的藝術形式，需要多種樂器協同配合。因此，京胡在定弦時需要考慮與其它樂器的音高關係，以確保整個樂隊的和諧。
琴弓的鬆緊程度：琴弓的鬆緊程度也會影響到琴弦的振動頻率，因此在定弦時需要考慮到這一點。弓子要保持適度的鬆緊程度，既不能太松導致音不準，也不能太緊導致聲音過於尖銳。
京胡的定弦不是固定的，而是根據不同的演奏需求和場合進行調整。例如，在傳統京劇伴奏中，京胡在演奏裡弦時，京二胡通常是用高八度的音來演奏。現代戲裡一般為了和交響樂隊相配合，固定成E調。
京胡的音階以自然大音階為基礎音階，音程結構是五個全音(大二度)、兩個半音(小二度)。兩個半音在3—4之間和7—1之間。一個全音相當兩個半音。這是以十二平均律為基礎的音階。京胡的里外弦應是按純五度定音的。由於演員「調門」不同，還由於西皮、二黃、反二黃各種調式的「1」位音高也不同，因此，京胡的定弦不是固定的。