梯度洗脫(gradient elution)又稱為梯度淋洗或程式洗脫。
梯度洗脫是在同一個分析周期中，按一定程式不斷改變流動相的濃度配比的過程。在分離過程中，流動相的組成、極性、pH等按照一定程式連續變化，使樣品中各組分能在最佳的分配比下出峰。這種方法可以使一個複雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。特別是在樣品中組分的分配比值範圍很寬的情況下，梯度洗脫可以很好地解決保留時間短、擁擠甚至重疊的組分，或保留時間過長而峰形扁平的組分的問題。例如，在使用水和甲醇進行梯度洗脫時，可以設定不同的濃度配比，如前十分鐘水:甲醇=2:1，中間十分鐘水:甲醇=1:1，最後十分鐘水:甲醇=1:2，這樣的階梯式的洗脫方法可以讓樣品中的不同組分按照其性質逐一被洗脫出來，從而達到更好的分離效果。