定氮法，特別是凱氏定氮法，是一種用於測定有機化合物中氮含量的常用方法。其原理和步驟如下：
原理。在有催化劑（如硫酸銅）的條件下，使用濃硫酸消化樣品，將樣品中的有機氮轉化為無機銨鹽。然後在鹼性條件下，銨鹽被轉化為氨氣，通過水蒸氣蒸餾出來，並被過量的硼酸溶液吸收。接著使用標準鹽酸溶液滴定，根據鹽酸的消耗量計算出樣品中的氮含量。由於蛋白質中的氮含量相對恆定，因此可以通過氮含量來估算蛋白質的含量。
步驟。分為消化、蒸餾、吸收與滴定三個主要過程。在消化過程中，使用濃硫酸和催化劑（如硫酸銅）一起加熱消化樣品，使蛋白質分解，其中的氮轉化為氨，並與硫酸結合生成硫酸銨。在蒸餾過程中，通過加鹼使氨游離出來，然後通過蒸餾釋放。在吸收與滴定過程中，氨被硼酸吸收，然後用標準酸（如鹽酸或硫酸）滴定，從而計算出氮的含量。
此外，凱氏定氮法的使用範圍廣泛，適用於多種樣品和化合物。但這種方法也有其局限性，例如不能區分氮的來源，可能導致對蛋白質含量的高估。例如，含有高氮量的三聚氰胺等非蛋白質成分，如果未經適當處理，可能會影響氮含量的準確測定。