心磷脂（Cardiolipins，CL）的合成是一個複雜的生物化學過程，主要涉及以下步驟：
甘油二酯途徑：心磷脂的合成開始於甘油二酯途徑，其中3-磷酸甘油醯化產生磷脂酸。
活化磷脂酸：磷脂酸隨後被活化為CDP-二醯基甘油（CDP-DAG）。
合成磷脂醯甘油：CDP-DAG與另一個3-磷酸甘油酯反應，生成磷脂醯甘油磷酸酯。
去除磷酸：磷酸酶將磷酸從末端甘油中除去，從而產生磷脂醯甘油。
形成心磷脂：在原核和真核細胞中，心磷脂的合成途徑在這一步驟匯合。在真核生物中，第二個CDP-二醯基甘油分子與磷脂醯甘油反應並生成心磷脂，同時釋放CMP。而在原核生物中，心磷脂由兩個磷脂醯甘油分子產生，同時釋放游離甘油。
這一過程在原核生物和真核生物中有所不同，其中真核生物中的第二個CDP-二醯基甘油分子與磷脂醯甘油反應，而原核生物則通過兩個磷脂醯甘油分子的方式合成心磷脂。