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投射電鏡方法

透射電鏡方法是一種用於觀察和分析材料微觀結構的技術,主要用於生物學、醫學和材料科學等領域。以下是透射電鏡方法的詳細步驟:

取材:迅速將樣品從其原始環境中取出,並放入培養皿中。使用刀片將樣品切成小塊,組織塊大小通常小於一立方毫米。

前固定:將樣品放入含有2.5%固定液的試管中,固定時間需超過兩小時。

清洗:使用PBS緩衝液對樣品進行漂洗,共三次,每次15分鐘。

後固定:將樣品放入四氧化釷固定液中,固定2到4個小時。

再次清洗:用PBS緩衝液漂洗三次,每次15分鐘。

梯度脫水:使用不同梯度的乙醇和丙酮進行脫水,例如30%-90%乙醇脫水15分鐘,100%乙醇和100%丙酮脫水20分鐘兩次。

滲透:使用不同比例的丙酮和滲透液進行滲透,具體時間根據比例而定。

包埋:利用包埋模具將樣品包埋,並用牙籤將樣品轉移到新的試管中。

固化:將含有樣品的試管放入聚合箱中,固化時間約為12小時。之後,輕輕敲擊試管底部以取出樣品。

切片:首先使用刀片進行粗修塊,然後在超薄切片機上進行細修塊,最後進行超薄切片,使樣品的厚度達到50到70納米。切片完成後,使用銅網將樣品撈出,並進行鉛釉雙染色,以便於電鏡觀察。

以上步驟是透射電鏡方法的基本流程,確保了樣品在觀察前的質量和清晰度。通過這種方法,研究人員可以觀察到材料的微觀結構,從而深入了解其特性和行為。