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福林酚法

福林酚法(Lowry法)是一種廣泛套用於蛋白質測定的方法,它通過雙縮脲反應和Folin試劑反應的結合來測定蛋白質含量。以下是該方法的詳細介紹:

原理。在鹼性條件下,蛋白質與銅離子作用形成蛋白質-銅絡合物,然後該絡合物將磷鉬酸-磷鎢酸試劑(Folin試劑)還原,產生深藍色的磷鉬藍和磷鎢藍混合物。這種顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。

優點和缺點。福林酚法的優點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,其定量範圍為5至100微克蛋白質。然而,該方法也有一些缺點,如費時較長,操作時間需要精確控制,標準曲線不是嚴格的直線形式,且專一性較差,容易受到多種干擾物質的影響。

試劑與操作。試劑包括鹼性溶液(如碳酸鈉和氫氧化鈉的混合物)、硫酸銅、酒石酸鈉(試劑甲)和Folin試劑(磷鎢酸和磷鉬酸的混合物)。操作步驟包括製作標準曲線、樣品處理、加入試劑甲和Folin試劑乙,然後在一定條件下顯色,最後用分光光度計測定吸光度。

替代方法。由於Folin-酚法的複雜性,近年來考馬斯亮蘭法逐漸取代了它,作為更簡便、更穩定的蛋白質測定方法。

總之,福林酚法是一種靈敏度高的蛋白質測定方法,但其操作複雜且易受干擾。在實際套用中,應根據具體需求和條件選擇合適的蛋白質測定方法。