青黴素的製作過程主要包括菌種發酵和提取精製兩個步驟。以下是兩個步驟的詳細介紹：
菌種發酵。首先，將產青黴素的菌種（如產黃青黴）接種到固體培養基上，在25℃下培養7至10天以獲得青黴菌孢子培養物。接著，用無菌水將孢子製成懸浮液並接種到發酵罐內的已滅菌的培養基中。在發酵過程中，需通入無菌空氣並攪拌，同時在27℃下培養7天，補入苯乙酸前體及適量的培養基。
提取精製。發酵完成後，冷卻發酵液並過濾。濾液在pH值為2至2.5的條件下，用醋酸丁酯進行多級逆流萃取。萃取液經活性炭脫色後，加入成鹽劑，通過共沸蒸餾處理，可以得到青黴素G鉀鹽。青黴素G鈉鹽是通過青黴素G鉀鹽與離子交換樹脂（鈉型）反應而製得。
整個過程需要精確的溫度控制、適宜的pH值和無菌環境，以確保青黴素的純度和活性。