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cck8法

CCK8法,全稱Cell Counting Kit-8,是一種用於測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數目的高靈敏度、無放射性的比色檢測法。該方法利用了WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)這一化學物質。在電子耦合試劑存在的情況下,WST-8可以被線粒體內的脫氫酶還原,生成高度水溶性的橙黃色甲瓚產物(formazan),其顏色的深淺與細胞增殖成正比,與細胞毒性成反比。因此,通過測量吸光度,可以間接評估活細胞的數量和細胞的代謝活力。

CCK8法的實驗步驟通常包括:

在96孔板中鋪板,每孔加入一定數量的細胞和培養基。

加入濃度梯度的藥物或進行其他實驗處理。

孵育一定時間後,每孔加入CCK8溶液。

繼續孵育一段時間後,使用酶聯免疫檢測儀測定450nm波長處的吸光度。

與MTT法相比,CCK8法具有以下特點:

靈敏度高,數據可靠,重現性好。

水溶性,不需要換液,尤其適合於懸浮細胞。

無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低。

為一瓶溶液,無需預製,即開即用。

CCK8試劑盒已被廣泛套用於藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定和腫瘤藥敏試驗等領域。它在國內外科研院所、大學和醫院中被廣泛使用,具有較高的國際認可度。