cDNA合成是一種重要的分子生物學技術，主要用於轉換RNA（尤其是mRNA）為DNA。這一過程涉及以下步驟：
在逆轉錄酶的催化下，以RNA（尤其是mRNA）為模板，合成一條與RNA互補的單鏈DNA（單鏈cDNA）。這一步可能使用隨機引物、oligo(dT)或基因特異性引物。
通過核酸酶的作用使RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈降解，形成單鏈DNA。
以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補的DNA鏈，形成雙鏈DNA分子（雙鏈cDNA）。
cDNA合成是RT-PCR等下游實驗的關鍵步驟。它不僅限於mRNA的轉換，還廣泛套用於基因表達分析、基因克隆和基因組學研究等領域。cDNA合成的效率受多種因素影響，如RNA的質量、逆轉錄酶的選擇、引物的適當性、反應條件（如溫度、pH、離子強度）以及後續的純化過程。