《鬼泣5》（DMC5）的主要角色包括：
尼祿：年輕的惡魔獵人，失去了他的惡魔右手「DEVIL BRINGER」，但在Nico的幫助下獲得了新的兵裝，繼續與惡魔戰鬥。
但丁：傳奇的惡魔獵人，Devil May Cry事務所的主人，半魔人，以高強的實力和從容不迫的態度著稱，再次投身對抗惡魔侵略的戰鬥。
V：一位神秘的新角色，隨身攜帶手杖和詩集，通過情報販子Morrison委託但丁討伐魔物，他的戰鬥能力依賴於手下的三頭魔獸。
其他角色包括：
翠西：美麗的金髮惡魔，曾與但丁敵對，後成為夥伴，與但丁保持不即不離的關係。
蕾蒂：操作高威力重武器的惡魔獵人，與但丁成為能夠共斗的獵人夥伴。
妮可：自稱武器藝術家，為尼祿打造了「DEVIL BREAKER」，並與他一同行動。
維吉爾：但丁的孿生兄弟，傳奇魔劍士斯巴達的長子，本作的最終BOSS。
每位角色都有其獨特的戰鬥風格和故事背景，玩家可以選擇不同的角色進行遊戲。