EGTA是一種廣泛使用的鈣離子選擇性的螯合劑，它能夠與鈣離子形成非常穩定的複合物，這種複合物比與鎂離子形成的複合物要穩定100,000倍。因此，EGTA常用於在鎂離子存在的情況下測定鈣離子濃度。EGTA在容量分析及光度分析中作為微量金屬的絡合劑和掩蔽劑，也可以用於滴定鋇、鍶、銅、鎂和鋅等金屬離子。
此外，EGTA在生物醫學研究中具有多種功能，例如：
作為RNA逆轉錄酶中RNA的脫氧測序緩衝器的組分。
保護神經細胞免受一氧化氮誘導的鈣外流引起的死亡。
激活大鼠肝臟質膜中鈣離子刺激的ATPase活性。
誘導PC12細胞發生凋亡。
抑制鋅依賴性的肽鏈內切酶（MMPs）的生理活性。
在ELISA反應中用作鹼性磷酸酶（AP）活性的抑製劑。
EGTA還能夠螯合血液內的鈣離子以起到抗凝作用，儘管在這個用途上EDTA的套用率更高。在分子生物學領域，EGTA用於製備鈣離子緩衝液和控制鈣離子濃度。