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sybr green法

SYBR Green法是一種在實時螢光定量PCR(qPCR)中常用的染料法,它依賴於SYBR Green I染料,這是一種僅與雙鏈DNA結合的螢光染料。在PCR過程中,SYBR Green I與雙鏈DNA的小溝結合,並在激發光照射下發出螢光。由於這種結合僅發生在雙鏈DNA上,螢光信號的強度直接反映了PCR產物(雙鏈DNA)的數量,從而實現了對PCR過程的實時監測。

SYBR Green法的優點包括良好的通用性,適用於大多數定量反應,且無需設計探針,引物設計相對簡單。這種方法成本較低,不需要合成探針,且無需PCR後處理,減少了分析工作量並節省了材料成本。然而,它也有一些缺點,例如只能在一個反應中檢測一個基因,無法進行二重或多重實驗。此外,相對於TaqMan探針法,SYBR Green法的特異性較差,在引物存在二聚體或非特異性擴增時,染料可能會結合併發出螢光,影響定量結果的準確性。為了克服這些問題,設計良好的引就顯得非常重要。

在實際套用中,SYBR Green法被廣泛用於基因表達分析病原體檢測轉基因食品檢測和基因拷貝數確定等領域。通過熔解曲線分析,可以幫助識別非特異性擴增,從而提高實驗的特異性。