Western blot（也稱為蛋白質免疫印跡）是一種常用的生物化學技術，用於分離和鑑定蛋白質。其基本原理如下：
通過SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離樣品中的蛋白質。在這一步，蛋白質樣品與SDS（十二烷基硫酸鈉）混合，使所有蛋白質變性並被負電荷覆蓋，確保它們根據分子量在電場作用下分離。
分離後的蛋白質從凝膠轉移到固相支持物上，如硝酸纖維素膜(NC膜)或聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜)。這一過程利用電流將帶負電的蛋白質從凝膠中轉移到膜上。
轉移後的蛋白質與特異性抗體（一抗）孵育，這些抗體能夠識別並結合目標蛋白質。未結合的抗體通過洗滌去除。
隨後，膜與帶有酶或同位素標記的二抗孵育，二抗能夠特異性識別並結合一抗。這種結合方式起到放大檢測信號的作用。
最後，通過底物顯色或放射自顯影檢測結合的二抗，從而揭示目標蛋白質的存在和量。這一步驟產生的信號可以直接觀察或用於定量分析。
通過上述步驟，Western blot能夠提供關於特定蛋白質在給定細胞或組織中的表達信息，具有高解析度和強特異性。