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三氯乙酸 沉澱法

三氯乙酸 沉澱法是一 種 用於分 離和 純化蛋白 質的技 術,其基本原理是利用三氯乙酸(TCA)在酸性 條件下 與蛋白 質形成不溶性 鹽,同 時作 為蛋白 質 變性 劑使蛋白 質 構象 發生改 變, 從而暴露出更多的疏水性基 團, 導致蛋白 質聚集 沉澱。具 體步 驟通常 包括:

將TCA加入到蛋白 質 樣品中,使TCA的最 終 濃度 達到20%(w/v)。

在冰上孵育 樣品20至30 分鐘,使TCA 與蛋白 質充分反 應。

室 溫下 離心 樣品,使 沉澱物 與上清液分 離。

去除上清液,保留 沉澱物。

用丙酮洗 滌 沉澱物以去除 殘留的TCA,然 後 乾燥 沉澱物。

使用含2- 巰基乙醇的 樣品 緩衝液溶解 乾燥的 沉澱物, 用於 進一步的 電泳分析。

此外,三氯乙酸 沉澱法也 套用 於特定物 質的 測定,如 結合 薑黃素法 測定血 紅蛋白氧 載 體中的硼 殘餘含量。 這 種方法涉及使用三氯乙酸 沉澱血 紅蛋白氧 載 體中的聚合血 紅蛋白,然 後通 過一系列化 學反 應和 顏色 變化,最 終在特定波 長下 進行定量 測定。整 個 過程中,需要 對 條件 進行 最佳化,以 確保 測定的 準確性和 重複性。