己烯雌酚的合成通常涉及以苯酚為起始原料，通過多聚磷酸（PPA）為催化劑，與正丙酸進行Friedel-Crafts醯基化反應製得對一羥基苯丙酮。然後，將酚羥基酯化保護，在四氫呋喃溶液中使用TiCl4/Zn進行還原偶合。接著，通過氫氧化鉀水解脫去醋酸根，最後經鹽酸酸化處理，得到己烯雌酚。
此外，還有一種氘標記的己烯雌酚合成方法，該方法涉及將己烯雌酚溶於氘水與有機溶劑的混合溶劑中，然後加入混合金屬催化劑與強鹼催化劑進行氫氘交換反應。通過萃取、層析等常規純化手段，可以得到目標化合物。這種方法製得的化合物的純度和同位素豐度均在99%以上，適合作為檢測己烯雌酚獸藥殘留的內標物使用。該方法原料易得且廉價，合成成本低，步驟少，操作簡單快捷，降低了檢測成本。