手套箱的操作方法主要包括開機、物品放入手套箱、物品拿出手套箱以及關機等步驟。以下是詳細介紹：
開機。打開主電源開關；打開工作氣減壓閥，將主閥門開到最大，副閥門開到0.4~0.6Mpa；啟動分析儀，確保氧指標在水指標降到200ppm以下時開始顯示；啟動循環，確保水氧值均小於200ppm，否則需清洗至200ppm以下再開循環；將箱體壓力設定為+1~+6mbar。
物品放入手套箱。給過渡倉補氣，補氣結束後關閉；保證內倉門為關閉狀態；打開外倉門，將物品放入倉內，關閉外倉門；抽氣、補氣各三次（根據物品類型調整次數）；打開內倉門，取出物品；關閉內倉門，抽至負壓狀態後，放置待用。
物品拿出手套箱。給過渡倉補氣，補氣結束後關閉；打開內倉門（確保倉內氣氛為惰性氣氛，不確定時需先抽氣、補氣三次）；把物品放入倉內，關閉內倉門；打開外倉門，取出物品；關閉外倉，抽至負壓狀態。
關機。關閉水氧分析儀；關閉循環；關閉真空泵；等待半個小時，確保箱體內壓為0mbar以上；關閉工作氣減壓閥主閥；關閉主電源開關。
此外，在使用手套箱時，還需注意以下事項：確保手套箱周圍無燃燒物，保持良好的通風環境；在使用前進行必要檢查，確保運行正常；佩戴適當的個人防護裝備；保持手套箱內乾燥清潔；避免放置食品、飲料等非實驗室物品；避免使用過大或尖銳工具，以防損壞內部材料或設備。