《最後的晚餐》是基督教宗教畫中最著名的一幅，以《聖經》中耶穌跟12個門徒共進最後一次晚餐為題材，由於在場的一盲眼弟子猶大出賣了他，使耶穌被捕並被釘死在十字架上，從此這最後的晚餐便成為耶穌跟弟子們建立的宗教象徵符號**。
《最後的晚餐》取材於《聖經》記載，表現的是耶穌最後一次和門徒們共進晚餐時，拿劍刺向自己，而門徒們明日清晨將和羅馬兵丁們一起在彼岸迎接他。達文西用暗喻手法，用動作和表情來暗示主題，整個畫面充滿肅殺的氣氛。畫面中耶穌的臉部表情非常柔和、平靜、祥和，對應了傳說中他向信徒們許諾，“我為你們再來時，你們全不能看見我。我的身體雖死，但在我被釘十字架受死之後，第三天我又復活了。”的記述。