酶的固定化方法主要有以下幾種：
吸附法。此方法利用各種固體吸附劑將酶或含酶菌體吸附在其表面，常用的吸附劑包括活性炭、氧化鋁、矽藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。操作簡便，條件溫和，不會引起酶的變性失活，載體價廉易得，可反覆使用，但酶與載體結合不太牢固，易脫落。
包埋法。此方法將酶包埋在聚合物中，常用的聚合物包括凝膠和半透膜。包埋法分為凝膠包埋法和半透膜包埋法，其中凝膠包埋法將酶或含酶菌體包埋在各種凝膠內部的微孔中，而半透膜包埋法則是將酶分子定位於半透性的聚合體膜內製成微膠囊。這種方法操作簡單，可製得較高活力的固定化酶。
共價鍵結合法。此方法涉及酶蛋白側鏈基團和載體表面上的功能基團之間形成共價鍵。這種方法製得的固定化酶穩定性好，但製備過程中反應條件較為強烈，易使酶變性失活，且製作手續繁瑣。
交聯法。此方法利用雙功能或多功能試劑在酶分子間或酶與載體間進行交聯反應。常用的試劑包括戊二醛、己二胺等。這種方法製備的固定化酶結合牢固，可長時間使用，但由於交聯反應較激烈，可能導致酶活力的損失。