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bradford方法

Bradford法是一種常用的蛋白質濃度測定方法,其原理是基於考馬斯亮藍(CBB)染料與蛋白質的結合。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色,最大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合後變為青色,蛋白質—色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用於蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。

實驗過程中,需要配製一組濃度分別為0.10mg/ml,0.08mg/ml,0.06mg/ml,0.04mg/ml,0.02mg/ml,0mg/ml的牛血清蛋白BSA)溶液,測定這組溶液的吸光度,得到蛋白質濃度對吸光度的一條標準曲線。然後測定未知蛋白質濃度樣品的吸光度,根據標準曲線得到蛋白質的濃度。

此外,Bradford法的檢測蛋白濃度時必須構建一個標準曲線。常規檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1,檢測濃度範圍為0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比較好線性濃度範圍在0.01-1mg/ml。當使用基座檢測時,推薦使用4μl樣品和200μl Bradford試劑。微量檢測使用試劑/樣品的體積比為1:1,可以檢測蛋白濃度範圍從15ug/ml至125ug/ml。