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gst pull down原理

GST pull down是一種實驗方法,用於在體外驗證兩種蛋白質之間是否存在相互作用,其原理如下:

利用DNA重組技術,將目的蛋白與穀胱甘肽S-轉移酶(GST)融合,形成GST融合蛋白。

GST融合蛋白能夠與固化在載體上的穀胱甘肽(GSH)親和結合,從而將GST融合蛋白固定在GSH瓊脂糖珠上。

將這種固定的GST融合蛋白(作為「誘餌蛋白」)與細胞裂解液或純化的蛋白質混合,如果存在與誘餌蛋白相互作用的靶標蛋白,它們會結合形成複合物。

未結合的蛋白質會被洗去,而結合的蛋白質(包括誘餌蛋白和靶標蛋白)可以通過改變洗脫條件而回收。

通過SDS-PAGE電泳和蛋白質印跡(Western blot)分析,可以檢測並證實兩種蛋白質之間的相互作用。

此外,這種方法不僅可以用於驗證已知蛋白質之間的相互作用,還可以用於發現與目標蛋白質相互作用的未知蛋白質。