pH梯度萃取法是一種利用改變溶劑的pH值來分離不同酸鹼度的化合物的方法。具體操作時，可以將待分離的混合物溶於特定溶劑中，然後逐漸改變溶液的pH值，在每個不同的pH值下，用有機溶劑進行萃取。
例如，在分離生物鹼時，可以將生物鹼混合物溶於酸性水溶液中，然後逐漸調節溶液的鹼性，使pH值由低到高變化。在每個不同的pH值下，使用如氯仿等有機溶劑進行萃取，由於生物鹼的鹼性不同，它們會在不同的pH值下以鹽的形式被萃取出，從而達到分離的目的。另一種方式是將生物鹼溶於氯仿等有機溶劑中，然後用pH值由高到低的酸性緩衝液進行萃取，這樣鹼性較弱的生物鹼會先被萃取出。
這種方法基於這樣一個原理，即溶劑系統的pH值變化會影響化合物的存在狀態（如從游離態轉變為解離態），進而改變它們在溶劑系統中的分配係數，影響它們在兩相中的分布。因此，通過逐漸改變溶劑的pH值，可以有效地分離酸性、鹼性或兩性成分。