勵志

勵志人生知識庫

rna提取方法及原理

RNA提取是一種重要的分子生物學技術,用於從細胞和組織中分離RNA。常用的RNA提取方法是Trizol法,這種方法的主要原理和步驟如下:

原理。Trizol試劑是一種含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿的酸性溶液。GITC能不可逆地使蛋白質和RNase(RNA酶)變性。在酸性條件下,總RNA主要存在於上層水相中,而DNA和蛋白質則存在於中間層或下層有機相中。通過離心和用異丙醇沉澱,可以回收總RNA。為了滅活RNase酶,可以加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)。

步驟。

在組織或細胞中加入Trizol試劑以裂解細胞。

加入氯仿進行分層,使RNA進入水相。

分離出水相併加入異丙醇進行沉澱。

洗滌RNA沉澱,通常用75%乙醇。

乾燥RNA沉澱,並最終將其溶解在DEPC處理過的去離子水中。

在提取過程中,需要注意消除RNA酶的污染,因為RNA酶會降解RNA。這需要通過在實驗中使用RNase-free的耗材和試劑,以及在實驗台面使用75%酒精擦拭,操作過程中佩戴口罩、帽子和手套等來減少環境污染。此外,提取的RNA需要進行分光光度分析以確定其濃度和純度。