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ung酶防污染原理

UNG酶(尿嘧啶-DNA糖苷酶)的防污染原理主要基於其在PCR(聚合酶鏈式反應)過程中對含有dU(脫氧尿嘧啶)的DNA鏈的選擇性水解。具體來說:

替代dTTP:在PCR反應中,將傳統的dTTP(脫氧胸腺嘧啶核苷酸)替換為dUTP(脫氧尿嘧啶核苷酸),這樣在PCR擴增過程中,dUTP會摻入到DNA鏈中,形成含有dU的PCR產物。

UNG酶作用:UNG酶能夠選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或單鏈DNA中的尿嘧啶糖苷鍵。這一過程形成有缺失鹼基的DNA鏈,這些鏈在鹼性介質和高溫下會進一步水解斷裂,從而被消除。

溫度處理:在PCR反應前,UNG酶在25℃下催化水解含有dU的DNA鏈中的尿嘧啶鹼基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵,產生缺嘧啶位點。隨後進行95℃的熱處理,使UNG酶失活,同時高溫使得缺嘧啶位點的磷酸骨架極易水解斷裂,從而消除含有尿嘧啶的PCR產物的污染。

防止氣溶膠污染:由於UDG酶(UNG酶的另一種稱呼)的底物專一性,它在PCR體系中僅降解含有dU的PCR產物,而不會對模板DNA產生影響。這有效地預防了PCR擴增產物造成的氣溶膠污染,因為微量的PCR產物污染就可能導致擴增假陽性。

綜上所述,UNG酶通過在PCR過程中替代dTTP為dUTP,並利用其選擇性水解能力以及隨後的溫度處理,有效地消除含有尿嘧啶的PCR產物,從而防止氣溶膠污染,確保PCR反應的準確性和可靠性。