京胡的定弦主要遵循五度相生律，即相鄰兩弦的音高關係為純五度。具體的定弦方式會根據京劇曲牌的不同而有所變化，常見的定弦方式有：
C1、G1弦（反二黃）
G、D1弦（二黃）
A、E1弦（西皮）
D1、A1弦（反西皮）
有時還會用到F1、C2弦和E1、B1弦等。京胡的定弦不僅考慮音高關係，還需考慮演員的嗓音特點、樂曲風格和情感表達、與其他樂器的配合，以及琴弓的鬆緊程度。演奏者需要根據具體情況調整定弦，以確保音準和音色的協調，以及整個樂隊的和諧。
在調整音高時，可以通過琴碼調整法來微調。將琴碼稍向外扳可以降低音高，向內扳則可以提高音高。但需要注意的是，琴碼的位置不能調整過多，以免影響琴筒和琴皮的穩定性。
京胡的演奏坐姿和持琴方式也會影響定弦和演奏效果。演奏時，奏者兩腳平放分開，左手執琴於千斤鉤下，將琴筒放在左腿上，琴桿向左稍傾斜。右手持弓拉奏，運弓要平穩。左手按弦時，手型呈半圓形，以指尖和指肚之間的部位觸弦。指法包括揉弦、打音、滑音和倚音等技巧。