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7aad原理

7-Aminoactinomycin D(7-AAD)是一種螢光DNA染料,通常用於流式細胞儀分析中檢測或排除非活細胞。它被活細胞排除,因為它不能透過具有完整膜的活細胞,但可以通過在GC鹼基對之間插入並與具有高親和力的雙鏈DNA結合,穿透晚期凋亡細胞或壞死細胞並與其內的DNA結合。

7-AAD在光譜的遠紅色範圍內被檢測到,因此與常用探針如FITC的光譜重疊最小,可以與FITC等探針結合使用。它已被用於評估細胞凋亡和細胞介導的細胞毒性,並對已通過多種方法固定和透化的細胞中的DNA進行染色。

此外,7-AAD通常被用作碘化丙啶(PI)的替代方法,在流式細胞儀分析中區分和排除不可行的細胞。它可以使用488 nm(藍色),532 nm(綠色)和561 nm(黃色綠色)雷射線進行激發。

在細胞凋亡檢測中,7-AAD與Annexin V聯合使用可以區分細胞狀態。Annexin V是一種分子量為35-36 kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與磷脂醯絲氨酸(PS)高親和力結合。7-AAD不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整細胞膜,但可以穿透晚期凋亡細胞或壞死細胞並與其內的DNA結合。因此,當將Annexin V-APC(APC標記的Annexin V)與7-AAD聯合使用時,7-AAD被排除在活細胞(Annexin V-/7-AAD-)和早期凋亡細胞(Annexin V+/7-AAD-)之外,而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Annexin V-APC和7-AAD結合染色呈現雙陽性(Annexin V+/7-AAD+)。