siRNA（小干擾RNA）的合成方法通常包括化學合成、體外轉錄、使用siRNA表達載體，以及siRNA表達框架。這些方法各有特點，適用於不同的研究和套用場景。以下是這些方法的詳細介紹：
化學合成。這是一種常用的方法，可以通過固相合成技術逐步添加單個鹼基來合成具有特定序列的siRNA。這種方法可以合成出不同化學修飾的siRNA，以改善其穩定性、傳遞效率和選擇性。合成後的siRNA需要通過純化過程去除雜質，常用的純化方法包括反向相高效液相色譜法等。
體外轉錄。此方法首先合成針對siRNA序列的對應DNA鏈，然後利用RNA聚合酶進行體外轉錄得到所需的siRNA。這種方法成本較低，適用於長期研究。
使用siRNA表達載體。將siRNA對應的序列克隆至載體中，在體內表達所需的siRNA。這種方法適用於長期研究，因為siRNA直接在體內表達。然而，這種方法涉及克隆和測序步驟，實驗過程較為繁瑣且耗時。
使用siRNA表達框架。利用含有能表達siRNA分子的PCR產物，無需克隆至載體即可導入細胞抑制特定基因的表達。但由於PCR產物較難轉染到細胞中，可能導致實驗結果不理想。
選擇哪種方法取決於研究目的、可用資源以及對實驗效率的考慮。化學合成法提供高純度和特異性的siRNA，適合需要高質量siRNA的實驗；體外轉錄和經濟有效的選擇，適用於需要較低純度siRNA的實驗；使用siRNA表達載體和表達框架則更適合長期研究和體內實驗。