暗視野顯微鏡（dark field microscope）是一種特殊的光學顯微鏡，它利用斜射照明法來阻擋透過標本細節的直射光，從而通過反射光和衍射光來觀察標本。這種顯微鏡的基本原理是基於丁達爾效應，它通過特殊的聚光器使照明光線不能直接入射到物鏡之內，而是以斜向照射樣品，利用樣品表面的散射光和反射光進行觀察。因此，暗視野顯微鏡的視場成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現明亮的圖像。
暗視野顯微鏡具有高解析度，能夠觀察到小至4~200nm的微粒子，解析度可比普通顯微鏡高50倍。它主要用於觀察未染色的透明樣品，這些樣品因為具有和周圍環境相似的折射率，不易在一般明視野之下看得清楚。暗視野顯微鏡能見到物體的存在、運動和表面特徵，但通常不能辨清物體的細微結構。
與普通的明視野顯微鏡相比，暗視野顯微鏡的聚光器中央有遮光片，使得光線不能通過聚光器直接進入物鏡，而是只能從聚光器四周邊及未遮光的部位斜射到載玻片的標本上。這樣，觀察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線因光散射作用而使菌體發出亮光，反射到物鏡內，從而在顯微鏡中可見到暗視野中明亮的物像。