分光光度法的原理主要基於朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律，這是一種描述光吸收與物質濃度之間關係的定律。以下是其詳細介紹：
朗伯-比爾定律。這個定律描述了一束單色光通過含有吸光物質的溶液時，溶液的吸光度與吸光物質的濃度及液層厚度之間的正比關係。即A=Kbc，其中A是吸光度，K是比例常數，b是液層厚度，c是溶液濃度。這個定律是分光光度法的基礎。
分光光度計的工作原理。分光光度計使用一個可以產生多個波長的光源，通過一系列分光裝置（如稜鏡或光柵），產生特定波長的光源。光線透過測試樣品後，部分光線被吸收，然後通過測量樣品的吸光值來推斷樣品的濃度。
物質對光的選擇性吸收。不同物質對不同波長的光具有不同的吸收能力，這導致了物質對光的選擇性吸收。分光光度計通過測量特定波長下樣品的吸光度來進行定量分析。
綜上所述，分光光度法是一種基於光的吸收與物質濃度之間關係的分析方法，廣泛套用於化學、生物和醫學等領域。