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切刻平移

切刻平移,也稱為切口平移,是一種在體外向DNA分子引入放射性標記核苷酸的技術。該過程涉及以下步驟:

DNase I處理雙鏈DNA,使其隨機產生單鏈斷裂。

DNA聚合酶I的5'-3'外切酶活性從斷裂處5'端除去一個核苷酸,同時5'-3'聚合酶活性將一個放射性核素標記的單核苷酸引入到斷裂的3'端。

反應重複進行,結果標記的核苷酸代替了原來的核苷酸殘基,形成了放射性的DNA分子。

切刻平移的主要作用是對DNA的複製引物進行替代修復。此外,該技術也存在一些缺點,如放射物質攝入率較低、長時間反應後放射性物質可能被外切酶活性游離下來、需要高純度的模板DNA以及反應後必須除去未反應的放射性dNTP。