切口平移法(nick translation)的原理是利用微量的DNA酶I在DNA雙鏈上隨機切割單鏈，產生單鏈切口，切口處產生一個5′末端和一個3′末端。
在切口平移法中，DNA聚合酶I的5′→3′外切酶活性會從斷裂處的5′端除去一個核苷酸，同時其聚合酶活性將一個單核苷酸添加到斷裂處的3′端。隨著反應的進行，即5′端核苷酸不斷去除，而3′端核苷酸同時摻入，導致斷裂形成的切口沿著DNA鏈按合成的方向移動，這種現象稱為切口平移。如果在反應體系中加入放射性同位素標記的核苷酸，這些標記的核苷酸將取代原來的核苷酸殘基，產生帶有標記的DNA分子，用作DNA分子雜交探針。