勵志

勵志人生知識庫

同聚物加尾

同聚物加尾是一種分子生物學技術,主要用於在DNA分子的3'端添加一段寡聚核苷酸,以形成人工的黏性末端。這種方法的核心是利用末端轉移酶的功能,將核苷酸轉移到雙鏈DNA分子的突出或隱蔽的3'-OH上。具體來說,以Mg2+作為輔助因子,該酶可以在突出的3'-OH端逐個添加單核苷酸,如果用Co2+作輔助因子,則可在隱蔽的或平末端的3'-OH端逐個添加單個核苷酸。

同聚物加尾法的優點包括:

不易自身環化,因為同一種DNA兩端添加的序列是相同的,所以不存在自身環化。

載體和外源片段的末端是互補的黏性末端,所以連線效率較高。

用任何一種方法製備的DNA都可以用這種方法進行連線。

然而,這種方法也有一些不便之處:

方法繁瑣。

外源片段難以回收。由於添加了許多同聚物的序列,可能會影響外源基因的表達。

重組連線後往往會產生某種限制性內切核酸酶的切點。