孟德爾分離定律，也稱爲孟德爾第一定律，是一種遺傳學的基本定律，其核心要點是：在生物的體細胞中，控制同一性狀的遺傳因子以配對的形式存在，不發生融合；在形成配子時，成對的遺傳因子發生分離，分別進入不同的配子中，使得每個配子只攜帶成對遺傳因子中的一箇，這些配子隨後將遺傳信息傳遞給後代。
這個過程發生在減數分裂的過程中，特別是減數第一次分裂的後期，當同源染色體分離時，位於同源染色體上的等位基因也隨之分離。這個定律解釋了爲什麼雜合體（具有一對等位基因）的個體在產生配子時會隨機分配這些等位基因，從而產生兩種不同類型的配子，且這兩種類型的配子數量相等。
孟德爾的分離定律爲遺傳學提供了重要的理論基礎，它幫助解釋瞭如何從親本的遺傳特徵傳遞到後代，並且這個定律是現代遺傳學中基因理論的基礎。