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末端分析法

末端分析法主要用於分析蛋白質肽鏈兩端的胺基酸。具體可以分為N端分析和C端分析兩部分。

N端分析:

方法:

桑格-庫森法(Sanger法):一種常用的測序方法,適用於DNA和RNA的序列測定。

丹磺醯氯法DNS法):適用於蛋白質或多肽N末端的測定。

埃德曼降解法:可以連續測定胺基酸,並且可以自動化操作,是目前N末端序列分析中套用最廣的方法之一。

二硝基氟苯法FDNB法):也是一種用於蛋白質或多肽N末端測定的方法。

基於質譜的方法:利用質譜技術對蛋白質N末端進行精確分析,廣泛套用於蛋白質組學和生物標記物的發現。

套用:蛋白質N末端測序不僅用於確定胺基酸的種類和排列順序,還用於確認重組蛋白的表達情況,如是否完整表達、表達過程中是否發生斷裂以及N端序列是否發生修飾等。

C端分析:

方法:主要使用外肽酶,如羧肽酶,將肽鏈的羧基末端胺基酸切下進行分析。

綜上所述,末端分析法是蛋白質研究中的重要技術,隨著生命科學和測序技術的發展,這些方法也在不斷更新和進步。特別是埃德曼降解法和基於質譜的方法,在N末端序列分析中展現出廣泛的套用和優越性。