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花序浸染法

花序浸染法,也稱為花浸泡法,是一種通過農桿菌介導的花序浸潤來創造轉基因植物的簡便、高效、快速且重複性好、穩定性高的非組織培養轉基因方法。這種方法首先在擬南芥中獲得成功,隨後也被套用於蘿甘藍型油菜的轉化,顯示出其廣泛的套用價值。與真空滲透法相比,花序浸染法不需要進行真空處理,只需將發育的花組織簡單地浸泡在農桿菌液中,大大簡化了轉化過程。在轉化過程中,植株生長狀態、蔗糖表面活性劑是影響轉化效率的三個主要因素。為了在每個植株上得到較多的花芽,通常在大多數植株第一個花薹形成後剪去第一個花薹,解除頂端優勢,促使多個生花薹的同步出現。當大多數花序約1至10cm高時(剪主薹後4至8天)開始浸潤。農桿菌的培養包括取出保種的農桿菌菌液活化後,挑取農桿菌單菌落接入10mL無菌LB液體培養基中,28°C恆溫下250r/min振搖過夜培養。