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骨架蛋白染色法

骨架蛋白染色法是一種用於顯示細胞骨架的技術,具有簡單易行的特點,常用於研究骨架形態及完整性。

骨架蛋白染色法不能區分骨架蛋白的組成,對於一些太細的纖維,在光學顯微鏡下無法分辨。骨架蛋白染色法中,常用的一種試劑是鬼筆環肽。鬼筆環肽是從毒蘑菇鬼筆鵝膏中分離出的一種七肽毒素,它以極高的親和力和特異性結合肌動蛋白絲(F-actin),不會結合單體肌動蛋白(G-actin)。鬼筆環肽對大小纖維的親和力相近,在許多不同的動植物物種的肌肉和非肌肉細胞中,基本都按照一個肌動蛋白亞基與一個鬼筆環肽分子的化學計量比結合。鬼筆環肽的非特異性結合幾乎可忽略,染色和未染色區域的差異極其明顯。鬼筆環肽使得肌動蛋白聚合/解離的臨界濃度降至1μg/ml,可用作一種聚合增強劑。

另外,螢光染色法也是一種顯示細胞骨架的方法,它可以使用一種微絲解聚抑製劑,該抑製劑與肌動蛋白纖絲有強親和作用,使肌動蛋白纖絲穩定,抑制解聚,且只與F-actin結合。利用螢光標記可以清晰顯示細胞中微絲的形態,利用螢光顯微鏡對螢光標記的細胞骨架進行觀察,可以得到清晰的實驗結果。