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pull down原理

Pull down技術是一種體外蛋白質相互作用研究方法,其基本原理是將一種蛋白質(稱為誘餌蛋白)固定於某種基質(如Sepharose)上。

當細胞抽提液或其他含有目的蛋白的溶液通過這個基質時,與誘餌蛋白相互作用的蛋白質(稱為捕獲蛋白)會結合到基質上,而其他非相互作用蛋白質則隨溶液流出。被吸附的捕獲蛋白可以通過改變洗脫液或洗脫條件而被回收,從而獲得能與已知的誘餌蛋白相互作用的蛋白質。這種方法可以用於確定已知蛋白與未知蛋白之間的相互作用關係,並從體外轉錄或翻譯體系中檢測出蛋白質相互作用。

此外,Pull down技術也常使用特定的親和標籤(如GST)來融合誘餌蛋白,使其更易於固定和檢測。例如,GST Pull down技術中,誘餌蛋白與穀胱甘肽親和樹脂結合,通過洗脫和蛋白質印跡分析來證實兩種蛋白質之間的相互作用。