RNA聚合酶在生物體中扮演著至關重要的角色，特別是在基因表達調控和蛋白質合成過程中。以下是RNA聚合酶I、II、III的主要作用：
RNA聚合酶I（RNA Pol I）。主要負責合成核糖體RNA（rRNA），包括18S、5.8S和28S rRNA，這些rRNA對蛋白質合成至關重要，因為它們參與構成核糖體，而核糖體是蛋白質合成的基本場所。
RNA聚合酶II（RNA Pol II）。在真核生物中，它負責合成信使RNA（mRNA）、小核RNA（snRNA）和微RNA（miRNA），mRNA是蛋白質編碼的模板，snRNA參與RNA剪接和轉運過程，而miRNA則在基因調控中發揮重要作用。
RNA聚合酶III（RNA Pol III）。主要合成5S rRNA、tRNA和一些其他小RNA分子，5S rRNA與核糖體的功能密切相關，而tRNA是蛋白質合成途徑中不可缺少的載體，其他小RNA分子在細胞中也發揮多種生物學功能。
此外，RNA聚合酶II還參與長鏈非編碼RNA（lncRNA）的合成，lncRNA是一類長度較長的非編碼RNA，其功能多樣，涉及基因表達調控、RNA結構和蛋白質結合等。