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sds page分析

SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)是一種用於分離和鑑定蛋白質的技術。其原理和步驟如下:

原理。SDS-PAGE的核心在於SDS(十二烷基硫酸鈉)的作用,SDS是一種陰離子表面活性劑,能夠破壞蛋白質的二級和三級結構,並與蛋白質分子結合形成密度相同的短棒狀複合物。這些複合物的長度與蛋白質的分子量呈正相關,因此在電泳過程中,蛋白質的遷移率主要受其分子量大小的影響,而不是原有的電荷和分子形狀。

步驟。在電泳開始前,樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇的上樣緩衝液,並進行高溫處理,以確保SDS與蛋白質充分結合併使蛋白質完全變性和解聚。這樣處理後,蛋白質帶上大量負電荷,其遷移率只受分子量影響。在電泳過程中,蛋白質通過高度多孔性的濃縮膠,然後在分離膠中根據分子量大小分離。與非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳相比,SDS-PAGE消除了蛋白質原有結構對遷移率的影響,使得不同蛋白質根據其分子量大小進行高效分離。

SDS-PAGE廣泛套用於蛋白質樣品純度評估、蛋白質表達評估、蛋白質免疫化學鑑定以及定量鑑定等領域。