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western blot原理

Western Blot是一種常用的生物化學技術,用於檢測特定蛋白質的表達和分布。其基本原理如下:

樣品處理。首先,使用SDS(十二烷基硫酸鈉)處理樣品中的蛋白質,使它們變性並被負電荷覆蓋,這樣處理後的蛋白質可以根據其分子量在聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中分離。

電泳分離。在電場的作用下,蛋白質向陽極移動,由於SDS的作用,不同蛋白質之間相似的電荷-質量比使得它們可以根據分子量大小得到有效分離。

蛋白質轉移。電泳後,蛋白質從凝膠轉移到固相支持物(如硝酸纖維素膜或PVDF膜)上,這一過程稱為電轉印,支持物上的蛋白質保持其生物學活性。

免疫反應。在固相支持物上,轉移的蛋白質與一抗(特異性抗體)孵育,抗體識別並結合目標蛋白質。

檢測。隨後,與一抗結合的蛋白質通過與酶或同位素標記的二抗反應來檢測,二抗本身與一抗特異性結合。最後,通過底物顯色或放射自顯影來顯示目標蛋白質的存在和量。

Western Blot技術廣泛套用於分子生物學、生物化學、免疫遺傳學等領域,用於研究特定蛋白質的表達、分布和相互作用。