口哨的原理是利用雙唇、舌頭和氣流相互作用產生振動。
吹口哨時，雙唇合攏，中間留一小孔，舌頭放平，氣流通過這個小孔時產生振動，從而發出聲音。科學實踐表明，舌頭在口哨中起到改變振動頻率的作用，通過改變口腔容積來調整音調。例如，吹出聲音後，要想改變音調，就要靠口型和舌頭的調整，從而使口腔氣柱的大小不同。高音時縮小口腔容積，口型較扁；而低音則擴大口腔容積，使氣口變大。
此外，口哨的音量（響度）大小與氣息流量成正比，氣流越大，音量越大；氣流越小，音量也就越小。同時，音量大小也與氣口成反比，氣口越大，音量越小；氣口越小，音量就越大。