大提琴的定弦過程包括以下步驟：
確保每根弦都裝在規定的弦軸上，並且順序繞好。弦應該儘可能裝得直，以避免鬆動，同時要避免歪斜交錯，防止弦互相牽制。
弦穿入軸孔後，扭動方向應由里向外，避免反扭。
為了便於調弦，裝弦時就應調整好弦軸的方向和位置。
定弦時，一般先定準A弦的音高，然後根據A弦的音高分別定D、E、G弦。有時幾根弦動過之後，A弦的音高可能會偏低，因此需要反覆校對。
初學者在定弦時，可以先聽單音，待音高基本定準後，再同時拉兩根弦，並略微調整，直到音響完全諧和為止。
定弦的過程也是練耳的過程。在弦未定準之前不要練琴。
弦軸會因氣候變化而變緊或變松，影響調弦。此時，可以採取相應的措施，如太緊時用鉛筆芯塗軸，太松時塗點松香或粉筆灰。