分辨巴西龜的性別可以通過以下幾種方法：
觀察尾巴。雄性巴西龜的尾巴較細長，尾根離肛門較遠；雌性巴西龜的尾巴較短小，尾根離肛門較近。
觀察前爪指甲。雄性巴西龜的前爪指甲較長；雌性巴西龜的前爪指甲較短。
觀察腹甲形狀。雄性巴西龜的腹甲中央略微向內凹陷；雌性巴西龜的腹甲相對平坦。
觀察泄殖孔的位置。雌性烏龜排泄孔的位置距離尾甲很近；雄性的烏龜排泄孔距離尾甲較遠。
觀察體型。通常，同齡的烏龜中，公龜要比母龜小一些。
觀察下腹部甲片。公龜的下腹部長有甲片；母龜的下腹部不長甲片。
需要注意的是，這些特徵在幼年龜身上可能不太明顯，隨着年齡的增長，性別特徵會變得更加明顯。