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引物二聚體

引物二聚體是PCR反應中常見的副產品,主要由以下原因形成:

引物之間或引物自身的3』端部分鹼基互補結合,在Taq酶作用下從3』端延伸形成的小分子量雙鏈DNA片段。

模板量過低、引物濃度過高、引物長度過短、退火溫度低、循環次數過高。

消除引物二聚體的方法包括:

重新設計引物,避免引物之間或自身的3』端部分存在過多的互補鹼基。

增加模板使用量。

降低引物濃度。

提高退火溫度。

減少循環次數。

在反應混合物中加入少量的甘油或DMSO。

進行PCR反應時,確保在冰上配製反應混合物,並在PCR結束後避免產物在室溫下放置過長時間。

使用特定的引物設計軟體(如Primer 5)來識別和避免可能形成引物二聚體的序列。