引物的Tm值（熔解溫度）是指寡核苷酸在特定條件下（如特定的鹽濃度、pH值和溫度）形成雙鏈結構的溫度。在PCR（聚合酶鏈反應）中，合適的Tm值對於保證引物與模板DNA的特異性結合至關重要。
對於長度為25個鹼基以下的引物，其Tm值的計算公式為：Tm=4℃×(G+C)+2℃×(A+T)。而對於更長的寡聚核苷酸，Tm值的計算公式為：Tm=81.5+16.6×Log10[Na+]+0.41×(%GC)-600/引物長度。其中，%GC指的是引物中鳥嘌呤和胞嘧啶的比例，引物長度以鹼基對計算。
一般來說，擴增反應的Tm值範圍應該在55℃到60℃之間，這樣可以避免非特異性結合。上下游引物的Tm值差不宜超過2℃，且最好接近72℃，以使復性條件最佳。
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