核蛋白提取

核蛋白提取是一種用於研究細胞內蛋白質在特定細胞器中的分布和功能的實驗技術。以下是核蛋白提取的基本步驟：

細胞收集與預處理：

使用離心機在4°C下，以300g離心5min收集細胞。

用預冷的PBS洗滌細胞1-2次，去除培養基。

細胞裂解：

加入預冷的Buffer A和蛋白酶抑製劑混合物，使細胞懸浮。

在冰上放置10分鐘後，再次離心。

分離細胞組分：

將細胞沉澱重懸於Buffer B中，進行勻漿處理。

在冰上低速搖床孵育45分鐘後，以高速離心分離胞漿蛋白和核蛋白。

核蛋白提取：

離心後，上清液包含胞漿蛋白，而沉澱主要是核蛋白。

將核蛋白沉澱重懸於預冷的Buffer B中，進行最後的離心步驟。

收集上清液，即為提取的核蛋白。

蛋白定量與保存：

對提取的核蛋白進行定量，分裝後保存於-80°C，避免反覆凍融。

這些步驟是從細胞中提取核蛋白的基本流程，實際操作中可能需要根據具體的實驗要求和細胞類型進行適當調整。