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溴化乙啶染色原理

溴化乙錠(Ethidium bromide,簡稱EB)是一種高度靈敏的螢光染色劑,主要用於觀察瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠中的DNA。其染色原理如下:

EB不能穿過活細胞膜,但可以通過死細胞或破損的細胞膜進入細胞核,對DNA進行染色。EB含有一個可以嵌入DNA堆積鹼基之間的平面基團,這個基團固定在DNA中並與鹼基密切接近,導致染料與DNA結合併呈現螢光。

螢光特性:EB-DNA複合物的螢光產率遠大於未結合的EB染料的螢光產率。因此,在電泳凝膠中即使存在少量DNA,只要有游離的EB存在,也可以被檢測到。

檢測方法:溴化乙錠用標準302nm紫外光透射儀激發,並放射出橙紅色信號。這種信號可以用Polaroid底片或帶CCD成像頭的凝膠成像處理系統拍攝,從而實現對DNA的檢測和觀察。

安全性:溴化乙錠具有毒性,實驗時應戴專用手套,避免交叉使用,以保護實驗人員的安全。

綜上所述,溴化乙錠通過其特殊的平面基團嵌入DNA的堆積鹼基之間,與DNA結合後發出螢光,從而實現對DNA的高靈敏度檢測和觀察。