BCA法,即二辛可寧酸法,是一種廣泛套用於蛋白質定量分析的方法。其原理是在鹼性環境下,蛋白質與銅離子(Cu2+)發生反應,將銅離子還原成亞銅離子(Cu1+)。隨後,亞銅離子與BCA試劑結合,形成紫藍色複合物。這種複合物在562納米(nm)波長處有強烈的光吸收,而且其吸收值與蛋白質濃度成正比。因此,可以通過測定562nm處的吸光度來確定蛋白質的濃度。
與Lowery法和Bradford法相比,BCA法具有以下優點:
BCA法具有較高的靈敏度,操作更為簡單。
BCA法的試劑和形成的顏色複合物穩定性較好。
BCA法受干擾物質的影響較小。
BCA法不受去垢劑的影響。
BCA試劑盒通常包含足夠進行多次反應的試劑,以及用於製備標準曲線的牛血清白蛋白(BSA)標準品。在進行測定時,首先將BCA試劑與硫酸銅溶液按一定比例混合,製備成BCA工作液。然後,將標準品或樣品加入96孔板中,再加入BCA工作液啟動反應。反應產物在特定波長下的吸光度可通過酶標儀或分光光度計測定。通過比較樣品與標準品的吸光度,可以計算出樣品的蛋白質濃度。