《鬼泣5》的主要人物包括：
但丁（Dante）。魔王斯巴達之子，擁有不死之身，是頂級的惡魔獵人。但丁經營著一家名為「惡魔5月哭」的獵魔事務所，以唱歌跳舞和吹牛皮為樂。他的主要助手包括翠西和蕾蒂，但丁的侄子尼祿在遊戲中扮演重要角色。
尼祿（Nero）。年輕的惡魔獵人，因某事件失去了「惡魔的右臂（DEVIL BRINGER）」，後在Nico的協助下獲得了新的「兵裝」，成為遊戲中的主要角色之一。尼祿的戰鬥風格經典，除了使用槍和劍外，他的機械臂也成為了一種強大的武器。
V。一位神秘的詩人，基本上沒有任何戰鬥力，但在戰鬥時會命令手下的三頭魔獸攻擊。V的背景故事和動機在遊戲中保持神秘。
此外，《鬼泣5》還引入了其他角色，如武器專家妮可、惡魔之女翠西、武器藝術家蕾蒂，以及遊戲的最終Boss維吉爾。