DAB染色(二氨基聯苯胺染色)是一種用於檢測過氧化物酶活性的方法。其步驟主要包括:
玻片編號。首先對玻片進行編號標記。
切片製備。按照要求製備組織切片。
脫蠟。將切片放入二甲苯中脫蠟。
抗原修復。使用適當的抗原修復液處理切片,以恢復抗原性。
阻斷。使用阻水圈阻斷切片上多餘的液體。
過氧化氫封閉。使用過氧化氫封閉切片,以減少內源性過氧化物酶的活性。
非特異性蛋白封閉。使用血清封閉切片,減少非特異性蛋白的結合。
加一抗。加入特定目的蛋白的抗體,通常在4℃下過夜。
加二抗。加入對應的二抗。
DAB染色。使用DAB顯色液對切片進行染色,顯色時間根據需要進行調整,通常為幾分鐘到幾十分鐘。
終止顯色。使用自來水沖洗切片,以終止DAB顯色反應。
復染。使用蘇木素對切片進行復染,然後再次用自來水沖洗。
脫水透明。對切片進行脫水處理,並使其透明。
封片。使用中性樹膠對切片進行封片處理。
在進行DAB染色時,應注意安全,避免皮膚和眼睛接觸DAB染色液,以及在操作時遵守生物安全規定。此外,DAB染色液的濃度和使用時間可能需要根據不同的細胞類型和實驗目的進行調整,使用前應仔細閱讀說明書並進行預實驗以確保最佳結果。