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edman降解法

Edman降解法是一種用於確定多肽和蛋白質的胺基酸序列的經典方法,由Pehr Edman在20世紀50年代開發。其過程如下:

在弱鹼性條件下,多肽的氨基末端與異硫氰酸苯酯反應,形成一個穩定的苯氨基硫甲醯衍生物(PTC-肽)。

用酸處理後,這個PTC-肽會發生特異性裂解,釋放出N-端胺基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。

該衍生物經有機溶劑萃取後,在酸作用下轉化為穩定的苯乙內醯硫脲(PTH)衍生物。

通過高效液相色譜(HPLC)或電泳法分析生成的PTH-胺基酸,從而鑑定出相應的胺基酸。

每個降解循環都會導致多肽鏈減少一個胺基酸殘基,剩餘的多肽鏈可以進入下一個降解循環,繼續序列測定。

這種方法可以準確地測定蛋白質中胺基酸的排列順序,儘管它主要適用於較短的多肽片段(通常最多50~60個胺基酸),對於更長的多肽或蛋白質,需要先進行切割,然後再分別測序。此外,Edman降解法對於一級結構的確定非常有用,並且已經被自動化,使得高通量測序成為可能。